化學發光顯色試劑盒是一種超敏ECL化學發光試劑盒,本產品與二抗上偶聯的辣根過氧化物酶(HRP)發生化學反應發出螢光,從而可以通過用X光片壓片或其它適當化學發光成像設備檢測樣品。
HRP(40 kDa)已成為化學發光蛋白質印跡檢測的常規酶。其穩定性和較小的分子量使其應用逐漸普及,通過使每個IgG標記更多的分子,可實現更高的檢測靈敏度。此外,HRP化學發光底物的改良和發展使其相較AP底物具有更高的蛋白質印跡檢測靈敏度。
用于辣根過氧化物酶(HRP)的化學發光底物多為雙組分系統,由穩定的過氧化物溶液和增強型魯米諾溶液組成。
如果要制備工作液,需要將兩種組分混合在一起。當與結合有HRP標記抗體(或其他探針)的印跡一起孵育時,化學反應生成的發射光可在425nm下,通過X光膠片、CCD成像系統和用于檢測化學發光的磷光成像儀進行采集。發射光僅在酶-底物反應期間發生;
因此,一旦酶周圍的底物耗盡,信號輸出將停止。雖然X-光膠片能夠提供定性和半定量的數據,并可以用來確認靶蛋白的存在,但冷CCD成像裝置能夠提供定性分析、即時圖像處理,具有更高靈敏度、更高分辨率和比膠片更大的動態范圍等優點。
化學發光顯色試劑盒用于檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶(HRP)的抗體及其關聯的抗原。本試劑盒優化了底物組成,使用了新型高效增強劑,發光強度比傳統 ECL 顯色液提高了 50-100 倍,并有效地降低了背景。
試劑盒使用新的氧化劑代替不穩定的雙氧水,提高了試劑盒的穩定性。洗膜后用本產品配制的ECL工作液,室溫孵育膜數分鐘,將印跡膜用保鮮膜包被粘貼固定于X光片曝光暗盒。
然后轉入暗室將X光膠片壓在膜上曝光數秒到數小時,顯影定影后蛋白質或核酸條帶可清晰顯示在X光膠片上。
本試劑采用了*的發光底物系統,化學發光顯色試劑盒盒是目前靈敏的商業化熒光ECL檢測試劑。